液相色譜流動(dòng)相使用注意

                                                         液相色譜流動(dòng)相使用注意 

                                                      上海連橋生物科技有限公司

 流動(dòng)相溶劑的選擇

　　1.所選用的流動(dòng)相溶劑要有一定的化學(xué)穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應(yīng)，其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過(guò)程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。

　　2.溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測(cè)器的工作，溶劑應(yīng)與檢測(cè)器匹配，選擇不影響檢測(cè)器正常工作應(yīng)選擇在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)無(wú)吸收的流動(dòng)相。

　　3.在制備分離中, 溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去, 不干擾對(duì)分離組分的回收。

　　4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。

　　5.從實(shí)用角度考慮，溶劑應(yīng)當(dāng)價(jià)格低廉，容易購(gòu)得，使用安全，純度要高。

二、流動(dòng)相溶劑使用的注意事項(xiàng)

　　1.流動(dòng)相溶劑應(yīng)選擇HPLC的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑。流動(dòng)相使用前用0.45μm濾膜過(guò)濾、脫氣，清除微粒和灰塵。在送液泵內(nèi)，為了防止雜物（固體）進(jìn)入流路，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過(guò)，這會(huì)導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm濾膜過(guò)濾。流動(dòng)相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時(shí)，或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡，會(huì)導(dǎo)致泵誤動(dòng)作和輸液不暢，檢測(cè)器產(chǎn)生噪聲信號(hào)等。

　　2.流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后使用。流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí)，流動(dòng)相在恢復(fù)到室溫前，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機(jī)溶劑混合時(shí)，混合液變化大，往往會(huì)與室溫相差很大，務(wù)必注意。

　　3.做HPLC流動(dòng)相的試劑應(yīng)用HPLC級(jí)的、水應(yīng)用二次蒸餾水，水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換，防止長(zhǎng)菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時(shí)，水中的不純物會(huì)成為鬼峰，從而干擾分析結(jié)果。

　　4.流動(dòng)相的pH值過(guò)高或過(guò)低，流動(dòng)相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對(duì)試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對(duì)色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的

　　5.用緩沖鹽做流動(dòng)相時(shí)，在使用前和使用后都要用水清洗流路，絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。

　　6.若需要使用含鹽的流動(dòng)相，使用前請(qǐng)務(wù)必guo濾。并且使用該含鹽流動(dòng)相前，色譜柱需先用低比例有機(jī)相（有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動(dòng)相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，以免流動(dòng)相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

　　7.進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意梯度變化過(guò)程中流動(dòng)相的互溶性，避免因流動(dòng)相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問(wèn)題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時(shí)，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲(chǔ)存流動(dòng)相后在接柱子。

　　8.在更換兩種互不相溶的流動(dòng)相時(shí)，中間要用異丙醇溶液清洗過(guò)渡。例如：先用甲醇水做流動(dòng)相，然后在用正己烷做流動(dòng)相時(shí)，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動(dòng)相時(shí)還要考慮色譜柱是否更換。

　　9.儀器在短期（兩三天）不用時(shí)，流路中可以是甲醇或水。儀器在長(zhǎng)期不用時(shí)，流路中應(yīng)用甲醇。

　　10.對(duì)于UV等檢測(cè)器用于高靈敏度檢測(cè)時(shí)，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動(dòng)相溶劑，如甲醇、乙腈等。

　　11.當(dāng)流動(dòng)相溶劑為乙腈時(shí)，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大，導(dǎo)致泵的流速降低。可適當(dāng)提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可。

　　12.流動(dòng)相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑，會(huì)對(duì)流路中的PEEK樹脂管路強(qiáng)度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺。流動(dòng)相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對(duì)流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時(shí)，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

　　13.用于檢定梯度等性能時(shí)，短時(shí)間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問(wèn)題的。

　　14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會(huì)引起爆炸。

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